Лечение кожных экспериментальных ран у лошадей с применением тромбоцитарной аутологичной плазмы

Д.в.н. профессор Семёнов Б.С., к.б.н. Кузнецова Т.Ш., Гусева В.А. аспирант ФГБОУ ВПО «СПБГАВМ».

Ключевые слова: тромбоцитарная аутологичная плазма, «ПлазмолифтингТМ», тромбоциты, факторы роста, лошади, раны, раневой процесс

Key words: autological platelets plasma, «PlasmoliftingTM», platelets, growth factors, horses, wounds, wound healing.

Актуальность

Применение тромбоцитарной аутологичной плазмы, приготовленной по технологии «ПлазмолифтингТМ», активно применяется в различных областях медицины. Эта технология была разработана д.м.н, профессором Р.Р. Ахмеровым и к.м.н. Р.Ф, Зарудием [1]. Технология «ПлазмолифтингТМ» применима для лечения различных патологий травматического характера у животных. Суть технологии заключается в том, что тромбоциты, попадая в мягкие ткани, разрушаются, выделяют факторы роста (трансформирующий фактор роста, тромбоцитарный фактор роста, эпидермальный, фактор роста фибробластов, фактор роста эндотелия сосудов, инсулиноподобный фактор роста, фактор роста эндотелиальных клеток) и другие биологически активные молекулы, таким образом способствуют ускорению регенерации тканей [2].

В связи с тем, что повреждения кожного покрова у лошадей встречаются довольно часто, нами было проведено исследование влияния тромбоцитарной аутологичной плазмы на лечение экспериментальных ран у лошадей.

Цели и задачи

Сравнить лечение экспериментальных ран у лошадей с применением тромбоцитарной аутологичной плазмы с обычными методами лечения. Оценить воздействие тромбоцитарной аутологичной плазмы на раневой процесс у лошадей.

Материалы и методы

Для опыта использовали беспородных лошадей, работающих в прокате, возраст от 5 до 10 лет. Лошадей кормили сеном и комбикормом фирмы «Гран – При». Всего две группы лошадей: подопытная и контрольная, в каждой группе по 3 лошади. Раны наносили в средней трети шеи. На операционном поле удаляли шерсть и обрабатывали 5% раствором йода. Обезболивание осуществляли 2% раствором лидокаина, в объёме 3 мл в одну точку. Диаметр ран составил 3,5 – 3,7 см.

Рисунок 1. Лошадь с нанесённой раной на латеральной стороне шеи (А, B).

Взятие крови у лошадей подопытной группы осуществляли из ярёмной вены. Кровь брали в пробирки «ПлазмолифтингТМ» (Россия) со специальным разделительным гелем в объёме 8 мл для приготовления тромбоцитарной аутологичной плазмы. Пробирки «ПлазмолифтингТМ» центрифугировали на центрифуге СМ-6 со скоростью 1500 об\мин 5 минут. После центрифугирования тромбоцитарная аутологичная плазма остаётся над гелем, а остальные форменные элементы - под гелем. Через час после приготовления тромбоцитарную аутологичную плазму исследовали в лаборатории с целью определения концентрации тромбоцитов. Тромбоцитарную аутологичную плазму сразу после получения вводили под дно раны, в объёме 3 мл. Лошадям подопытной группы тромбоцитаную аутопалазму вводили 4 раза с интервалом в трое суток: на 1-е, 4-е, 7-е, 10-е сутки. Оценивали раневой процесс через сутки после введения тромбоцитарной аутологичной плазмы: на 2-е, 5-е, 8-е, 11-е сутки, а также дополнительно на 24-е и 32-е сутки лечения. Дополнительно животным на рану ежедневно наносили мазь «Левомеколь». У животных контрольной группы раны лечили ежедневным нанесением мази «Левомеколь».

Результаты

Из 8 мл крови, взятой в пробирки «ПлазмолифтингТМ», получали 3 мл тромбоцитарной аутологичной плазмы. Никаких форменных элементов, помимо тромбоцитов, в плазме обнаружено не было. Концентрация тромбоцитов в аутологичной плазме 138,0 ± 35, 546 г\литр соответствовала концентрации тромбоцитов в клиническом анализе крови 133,4 ± 31, 509 г\литр. Различия между концентрацией тромбоцитов в тромбоцитарной аутологичной плазме и в клиническом анализе крови статистически не значимы.

Изменения диаметров ран у контрольной и подопытной групп лошадей представлены на нижеследующих рисунках.

Рисунок 2. Первые сутки. Раны лошадей до обработок. Вид ран после иссечения кожи и остановки кровотечения. Диаметр ран составляет 3,5 – 3,7 см у всех лошадей подопытной и контрольной группы (A – опыт, B - контроль).

Рисунок 3. 2-е сутки лечения (через 24 часа после первой инъекции тромбоцитарной аутологичной плазмы).

У подопытной группы лошадей отмечалось уменьшение ран в диаметре (таблица 1). Покрывание ран струпом произошло у обеих групп лошадей. Струп сухой у обеих групп и плотно прилегает по всей площади раны (A – опыт, B - контроль).

Рисунок 4. 5-е сутки лечения (через 24 часа после второй инъекции тромбоцитарной аутологичной плазмы.)

В подопытной группе лошадей было отмечено начало стадии гидратации: увлажнение струпа равномерно по всей поверхности. Струп плотно прилегает к ране по всей поверхности и по периферии. В контрольной группе лошадей также видно начало стадии гидратации: неравномерное увлажнение струпа, cтруп прилегает неплотно в центре, легко отделяется и плотно прилегает по периферии (A – опыт, B - контроль).

Рисунок 5. 8-е сутки лечения (через 24 часа после третьей инъекции тромбоцитарной аутологичной плазмы)

У подопытной группы лошадей отмечено сильное уплотнение струпа, струп плотно прилегает по всей поверхности раны. Консистенция струпа очень плотная. В то время как у контрольной группы лошадей заметно прогрессирование стадии гидратации: струп влажный, легко отсоединяется в центре и по периферии. Под струпом находился гнойный экссудат. Струп легко разрушается, крошится (A – опыт, B - контроль).

Рисунок 6. 11-е сутки лечения (через 24 часа после четвёртой инъекции тромбоцитарной аутологичной плазмы).

У подопытной группы лошадей ярко заметно начало краевой эпителизации и уменьшение ран в диаметре. Струп плотный, сухой, сильно гиперемирован. У контрольной группы лошадей заметно уменьшение ран в диаметре, прогрессирование стадии гидратации: струп более «рыхлый», местами отслаивается и крошится. Отмечено начало краевой эпителизации. Но у подопытной группы лошадей визуально площадь краевой эпителизации значительно больше, чем у контрольной группы животных (A – опыт, B - контроль).

Рисунок 7. 24-е сутки лечения

У подопытной группы лошадей отмечено уменьшение площади струпа. Струп по -прежнему гиперемирован. Краевая эпителизация занимает 45 % от всей площади раны. У контрольной группы лошадей отмечается стадия дегидратации: струп покрывает весь диаметр раны, местами увлажнён, краевая эпителизация незначительна, расположена по периферии (A – опыт, B - контроль).

Рисунок 8. 32-е сутки лечения.

Раны подопытной группы лошадей зажили. У контрольной группы лошадей краевая эпителизация занимала 50% площади от всей раны. Струп сильно гиперемирован.

Применение ТАП (тромбоцитарной аутологичной плазмы) для лечения ран совместно с мазью «Левомеколь» в подопытной группе лошадей способствовало более быстрому заживлению ран, по сравнению с группой лошадей, где применялась только мазь «Левомеколь» (A – опыт, B - контроль) . Данные измерения диаметров ран у лошадей на этапах лечения представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Динамика изменения диаметров ран лошадей на этапах лечения.

Номер инъекции	Сутки лечения	Диаметр ран контрольной группы, см	Диаметр ран подопытной группы, см
	До лечения	3,5 ± 0,2	3,5 ± 0,2
1	2	3,5 ± 0,2	2,5 ± 0,1*
2	5	3,5 ± 0,2	2,4 ± 0,1*
3	8	2,7 ± 0,2	1,5 ± 0,2*
4	11	2,6 ± 0,1	1,4 ± 0,1*

Примечание : * статистически значимо в отличие от контроля -р≤0,05

Согласно данным в таблице 1, до лечения различия в диаметрах ран статистически не значимы (р≤0,05) в контрольной и опытной группе лошадей . На 2-е, 5-е, 8-е и 11-е сутки лечения тромбоцитарной аутологичной плазмой наблюдали, что диаметр ран был достоверно (р≤0,05) меньше в подопытной группе по сравнению с контрольной группой лошадей.

Обсуждение

Заживление ран у лошадей происходит по гнойно-ферментативному типу. Характеризуется он гнойно-экссудативными явлениями, протекающими при выраженной гидратации в виде воспалительного отёка. На этом фоне развивается гнойно-ферментативный процесс, в результате которого происходит ферментативное разжижение мертвых тканей, подавление роста микробов, выведение во внешнюю среду инородных предметов и других загрязнений вместе с гнойным экссудатом [3]. Такую картину мы наблюдали у контрольной группы лошадей. У подопытной группы лошадей заживление ран происходило нетипично.

Сразу после нанесения раны имели одинаковый вид как в подопытной, так и в контрольной группах лошадей (рисунок 2).

Далее на 2-е сутки лечения (после первой инъекции тромбоцитарной аутологичной плазмы) у обеих группах происходило покрывание ран струпом, он был плотный и прилегал по всему диаметру ран (рисунок 3).

На 5-е сутки (после второй инъекции) стадия гидратации была слабо выражена (рисунок 4) и расплавление струпа отсутствовало у подопытной группы лошадей, не отмечалось появление гнойного экссудата. У контрольной группы лошадей происходило фрагментарное увлажнение струпа.

При продолжении лечения, на 8-е сутки лечения (после третьей инъекции) стадия гидратации раны отсутствовала в подопытной группе лошадей по сравнению с контрольной группой животных, в которой было заметно появление незначительного гнойного экссудата и струп легко отслаивался и крошился (рисунки 5,6).

На рисунке 6, на 11-е сутки лечения (после четвёртой инъекции) наблюдается значительная краевая эпитезизация раны у подопытной группы лошадей, в то время как у контрольной группы краевая эпителизация значительно менее выражена. На рисунке 7, 24-ые сутки лечения эпителизация занимает 45 % от всей поверхности раны у подопытной группы лошадей, а у контрольной группы отмечена стадия дегидратации раны и незначительная краевая эпителизация.

На рисунке 8, 32-е сутки лечения, наблюдается полное заживление ран в подопытной группе животных, в то время как в контрольной группе наблюдается значительная краевая эпителизация раны, cтруп сильно гиперемирован и составляет 50 % от поверхности диаметра раны. На наш взгляд, применение тромбоцитарной аутологичной плазмы совместно с традиционным лечением способствовало снижению воспалительного процесса и более раннему по времени заживлению ран у лошадей. Важно отметить, что в случаях задержки гноя в ране у лошадей гнойно-резорбтивная лихорадка при гнойно-экссудативном типе очищения, оказывается более выражена по сравнению с протеканием раневого процесса у других видов животных. [3]. Следовательно, применение тромбоцитарной аутологичной плазмы может быть рекомендовано для использования практикующими ветеринарными врачами не только как стимулятор регенерации ран, но и как профилактическое средство развития гнойного процесса и возникновения гнойно-резорбтивной лихорадки у лошадей в сложных клинических случаях.

Выводы

1.) Применение тромбоцитарной аутологичной плазмы способствовало заживлению экспериментальных ран у лошадей. Через сутки после четвёртой инъекции тромбоцитарной аутологичной плазмы диаметр ран у подопытной группы лошадей был меньше ран лошадей контрольной группы на 54 %.

2.) Лечение ран лошадей тромбоцитарной аутологичной плазмой практически исключило стадию гидратации из раневого процесса, что может служить профилактикой появления гноя в ране.

Список литературы

1)Р.Ахмеров, Р.Зарудий, И.Рычкова, О.Бочкова. Плазмолифтинг – новый метод современной косметологии, XIV международный конгресс по прикладной эстетики, Москва, КрокусЭкспо,14-16.04. 2011

2) Foster TE, Puskas BL, Mandelbaum BR, Gerhardt MB, Rodeo SA. Platelet-rich plasma: from basic science to clinical applications. Am J Sports Med. 2009, vol.37, №11, pp.2259-2272.

3) Семёнов Б.С., Виденин В.Н., Оперативная хирургия у животных. учебное пособие МСХ М. Колосс 2012.

Summary

Autological rich plasma is a very efficacy method for wound healing in equine veterinary medicine. And this method can prevent purulent process development.